Annexin V是檢測細胞凋亡的靈敏指標之一。在細胞發(fā)生凋亡時，細胞膜上的磷脂酰絲氨酸（PS）由質(zhì)膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)，而Annexin V與PS有高度的親和力，可以與暴露在細胞外側(cè)的PS結(jié)合。在細胞發(fā)生凋亡時，PS的外翻要早于細胞核的改變，因此與DNA碎片檢測比較，使用Annexin V可以更早的檢測到細胞的凋亡。但是細胞死亡時也會發(fā)生PS的外翻，所以Annexin V常與鑒定細胞死活的核酸染料PI結(jié)合使用來區(qū)分凋亡細胞（Annexin V+/PI-）和死亡細胞（Annexin V+/PI+）。
操作步驟：
1. 用不含EDTA的0.25%胰酶消化各組細胞，收集后1000rpm離心5min，PBS重懸。
2. PBS將細胞潤洗2次，1500rpm離心5min。
3. 各組樣品分別依次加入500μL Binding Buffer，5μL Annexin V-FITC，5μL PI，混勻，室溫避光反應5~15min。
4. 流式細胞儀上機檢測，CELLQuest軟件獲取和分析實驗數(shù)據(jù)。
在線客服
