如何選購人ELISA試劑盒
現(xiàn)在市面上國產(chǎn)與進(jìn)口的ELISA試劑盒，數(shù)量之多，數(shù)不勝數(shù)，令人目不暇接，質(zhì)量問題也在為廣大科研愛好者與研究者，糾結(jié)的問題，所以下面有我們告訴你在選購人ELISA試劑盒應(yīng)該要注意哪方面。
1. 檢測方法
酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。
此外人ELISA試劑盒結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。
如今檢測ELISA有許多途徑，我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。
一般ELISA檢測的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶（例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP），而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。
這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色，可以通過分光光度計進(jìn)行檢測，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。
2、人ELISA試劑盒的實驗類型
ELISPOT有點像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后在膜上檢測細(xì)胞分泌的抗原形成斑點。此外，我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實驗。
雖然有多種類型，不過它們都有一個共同特點，就是進(jìn)行抗原捕獲。
一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點ELISPOT是兩種特殊的類型，In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。
3. 分析抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA試劑盒，實際上有時候二者結(jié)合效果更好。例如，對于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時更有幫助。
多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。
4. 交叉產(chǎn)生的反應(yīng)
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會影響整個實驗的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個因素。
盡管現(xiàn)在購買源自動物的抗體越來越容易，我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測時，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。
如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合，實驗特異性就會大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來避免上述問題。
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